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纳通破壁机 | 重组人粒细胞刺激因子

发布日期:2023-08-09   浏览次数:268次

1.jpg 应用背景

CHO细胞是中国仓鼠卵巢细胞,1957年美国科罗拉多大学Dr.Theodore T.Puck从一成年雌性仓鼠卵巢分离获得,是生物工程上广泛使用的细胞系。分子生物学、分子免疫学等学科的发展使基因工程具有越来越重要的地位。在基因工程研究的动物细胞表达系统中,最具代表性的就是中国仓鼠卵巢细胞(ChineseHamster Ovary,CHO)。CHO细胞属于成纤维细胞,属于成纤维细胞,可贴壁培养,经多次传代筛选后也可悬浮培养,它是用来表达外源蛋白最多也最成功的一类细胞。



1.jpg 应用案例

       重组人粒细胞刺激因子(CHO细胞)系由高效表达人粒细胞集落刺激因子(G-CSF)基因的大肠杆菌,利用基因重组技术经发酵、分离和高度纯化后制成。与天然产品相比,生物活性在体内、外基本一致。G-CSF是调节骨髓中粒系造血的主要细胞因子之一,可选择性地作用于粒系造血祖细胞,促进其增殖、分化,并可增加粒系终末分化细胞即外周血中性粒细胞的数目与功能。


1.jpg 解决方案

       CHO细胞是一种非分泌细胞,本身很少分泌内源蛋白,因此对目标蛋白分离纯化十分有利;形成有活性二聚体,具有糖基化功能,是表达复杂生物大分子的理想宿主;具有不死性,可传百代以上,是生物工程广泛使用的细胞系。CHO细胞比微生物细胞更大,无细胞壁,机械强度较低,对剪切力敏感,环境适应能力差;配增时间长,生长缓慢,易受微生物污染;培养过程中细胞相互粘连以集群形式存在培养过程需氧量少,代谢产物具有生物活性,生产成本高。真核细胞中CHO细胞是目前重组糖基蛋白生产的首选体系,CHO细胞培养可在人工控制条件的生物反应器中大规模培养。大肠杆菌(E.coli)是使用最早的表达系统,其显著优点是易于操作,产量高,成本低。但由于用E.coli生产的蛋白质药物因缺乏糖基化而在人体内易被降解,因此它的药放大大降低。此外,它还存在易产生内毒素和包涵体的问题。



1.jpg 应用设备

       高压细胞破碎仪是生物工程中一种重要的实验、生产设备,能够快速、高效地将细胞破碎并释放其胞内物质。高压细胞破碎仪具有破碎组织、细菌、病毒、孢子及其它细胞结构,均质、乳化、混合、消泡、分散、提取、加速反应等功能,故广泛应用于生物工程、基因工程、细胞工程、酶工程、蛋白质工程、微生物工程、生物化学、表面化学、药物化学、生物医药、生物制品等等实验室研究或企业生产。高压细胞破碎仪是胞内物质(蛋白质、酶、核酸、DNA/RNA)的提取和均质主要的样品制备手段,可用于蛋白质研究、核酸萃取、破碎不同prokaryotic(原核)、eurkaryotic细胞等,是生物工程及生物制药等行业研发及生产的标准设备。



1.jpg 纳通优势
       高压低温破碎提取靶蛋白:通过高压细胞破碎仪使物料在柱塞作用下进入可调节压力大小的阀组中经过特定宽度的限流缝隙均质区在均质阀内产生三种效应:空穴效应、撞击效应、剪切效应的机械作用力从而打破细胞壁的束缚,把蛋白质从组织或细胞中释放出来尽可能保持原来的天然状态,不丧失活性,达到高效率破碎细胞的效果。采用高压细胞破碎法,在细胞内产生的压力效应,从而能够有效地提取出蛋白质,且处理量大、破碎速度较快。这是一种机械处理细胞,物理抽提方法。
◆破壁能力:高压设计,轻松上压;均质效率高,工艺稳定;稳定的破碎能力,更高的胞内物提取;纯机械破碎,无化学污染;可放大工业化生产工艺设备
◆控温效果:独特温控设计,内置和外置双向控温,确保均质过程及出料温度可控
◆活性保障:循环的控温系统,蛋白活性不失活,细胞破碎后,活性保值高达99%
◆无菌保障:金属结构连接,没有O型圈或垫片,无死角设计;在线排空结构设计;所有机型均可实现在线清洗(CIP)、循环清洗、拆装清洗、在位灭菌(SIP)


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