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纳通细胞破壁均质机 | 昆虫表达纯化

发布日期:2023-08-09   浏览次数:262次

1.jpg 应用背景

又称昆虫杆状病毒系统(Baculovirus expression vector system,BEVS),属于真核细胞表达系统,更接近哺乳动物细胞的表达系统,但不同于酵母和哺乳动物细胞表达系统。昆虫表达系统凭借其稳定的实验体系、高表达水平及翻译后修饰功能而被普遍认可为一种表达大规模蛋白的强有力的工具,可以提供高活性的重组蛋白,解决在其它体系中无法解决的蛋白活性困难。昆虫表达系统由于其具有高效的表达能力,通过BEVS得到的重组病毒易于筛选、具有翻译后修饰功能、表达外源基因的效率较高。BEVS还可以同时表达多个外源基因,在分泌蛋白生物活性的同时增加产量。因此,BEVS在科研和工业生产中通常应用于大规模重组蛋白的制备。应用的菌株有sf9、sf21、High-5等。



1.jpg 应用案例

       通过转座作用将转移载体中的表达组件定点转座到能在大肠杆菌中繁殖的杆状病毒穿梭载体上,通过抗性和蓝白斑筛选到重组穿梭质粒,提取穿梭质粒DNA转染昆虫细胞后,得到的子代病毒即为重组病毒。将病毒上清浸染昆虫细胞,获得表达的重组蛋白。昆虫表达系统相比其他表达系统,具有大蛋白正确折叠、具有真核翻译后修饰、毒性蛋白可被表达等特点,适用于病毒疫苗、信号分子、细胞因子、激酶等。用于生产具有哺乳动物细胞末端唾液酸化修饰的N糖蛋白。



1.jpg 解决方案

       通过菌种转基因的方式表达蛋白或核酸等物质,然后经过破壁后提取细胞内酶、蛋白质等活性的产物是生物工程中的重要技术。首先富集菌体,收集胞内产物的细胞或菌体。然后进行细胞重悬,用适当的缓冲液或培养液将离心或沉降等方法得到的固体(沉淀、细胞、活性物质等等)重新悬浮。其次进行细胞破碎,使产物转移到液相中。最后收集含生化物质的液相,进行碎片分离,分离除去细胞、菌体、细胞碎片、蛋白质的沉淀物和絮凝体等固体悬浮物,得到上清液或滤液。然后从澄清的滤液中提取胞内产物,从细胞裂解物中获取目标产物。



1.jpg 应用设备

       高压细胞破碎仪是生物工程中一种重要的实验、生产设备,能够快速、高效地将细胞破碎并释放其胞内物质。高压细胞破碎仪具有破碎组织、细菌、病毒、孢子及其它细胞结构,均质、乳化、混合、消泡、分散、提取、加速反应等功能,故广泛应用于生物工程、基因工程、细胞工程、酶工程、蛋白质工程、微生物工程、生物化学、表面化学、药物化学、生物医药、生物制品等等实验室研究或企业生产。高压细胞破碎仪是胞内物质(蛋白质、酶、核酸、DNA/RNA)的提取和均质主要的样品制备手段,可用于蛋白质研究、核酸萃取、破碎不同prokaryotic(原核)、eurkaryotic细胞等,是生物工程及生物制药等行业研发及生产的标准设备。



1.jpg 纳通优势
       高压低温破碎提取靶蛋白:通过高压细胞破碎仪使物料在柱塞作用下进入可调节压力大小的阀组中经过特定宽度的限流缝隙均质区在均质阀内产生三种效应:空穴效应、撞击效应、剪切效应的机械作用力从而打破细胞壁的束缚,把蛋白质从组织或细胞中释放出来尽可能保持原来的天然状态,不丧失活性,达到高效率破碎细胞的效果。采用高压细胞破碎法,在细胞内产生的压力效应,从而能够有效地提取出蛋白质,且处理量大、破碎速度较快。这是一种机械处理细胞,物理抽提方法。
◆破壁能力:高压设计,轻松上压;均质效率高,工艺稳定;稳定的破碎能力,更高的胞内物提取;纯机械破碎,无化学污染;可放大工业化生产工艺设备
◆控温效果:独特温控设计,内置和外置双向控温,确保均质过程及出料温度可控
◆活性保障:循环的控温系统,蛋白活性不失活,细胞破碎后,活性保值高达99%
◆无菌保障:金属结构连接,没有O型圈或垫片,无死角设计;在线排空结构设计;所有机型均可实现在线清洗(CIP)、循环清洗、拆装清洗、在位灭菌(SIP)


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