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纳通高压均质机 | 哺乳动物表达系统

发布日期:2023-08-14   浏览次数:254次

1.jpg 应用背景

       哺乳动物细胞系统蛋白表达是广为应用的人类复杂糖基化蛋白的表达系统,也是活性蛋白因子及各类受体蛋白的优异表达系统。哺乳动物细胞表达系统能够为重组人源蛋白提供更接近于天然状态的翻译后修饰、蛋白质折叠和聚合,具备活性蛋白所必须的空间结构和修饰。在蛋白表达过程中会形成接近天然蛋白的蛋白质折叠和聚合,具备活性蛋白所必须的空间结构和修饰,60%以上的的药用蛋白产品由哺乳动物细胞表达系统获得。在科研领域,为了获得有活性的重组蛋白,哺乳动物细胞表达系统是更好方案。



1.jpg 应用案例

       20世纪60年代以后,用细胞作为病毒培养基质制备的狂犬病疫苗逐渐取代了神经组织和禽胚疫苗,其中细胞培养基质主要有动物细胞包括原代地鼠肾细胞、鸡胚细胞及传代Vero细胞。常规实验中使用最多的宿主细胞是HEK 293细胞和CHO细胞,前者一般用于重组蛋白的瞬时表达,用于在短时间内获得少量具有生物活性的重组蛋白;而后者一般用于重组蛋白的稳定表达,CHO细胞由于其遗传性状稳定、生长速度较快、能够耐受一定的剪切力及渗透压且具有和人类相似的糖基化修饰等优点,在工业生产和医疗方面发挥着重要的作用。




1.jpg 解决方案

       通过菌种转基因的方式表达蛋白或核酸等物质,然后经过破壁后提取细胞内酶、蛋白质等活性的产物是生物工程中的重要技术。首先富集菌体,收集胞内产物的细胞或菌体。然后进行细胞重悬,用适当的缓冲液或培养液将离心或沉降等方法得到的固体(沉淀、细胞、活性物质等等)重新悬浮。其次进行细胞破碎,使产物转移到液相中。最后收集含生化物质的液相,进行碎片分离,分离除去细胞、菌体、细胞碎片、蛋白质的沉淀物和絮凝体等固体悬浮物,得到上清液或滤液。然后从澄清的滤液中提取胞内产物,从细胞裂解物中获取目标产物。



1.jpg 应用设备

高压细胞破碎仪是生物工程中一种重要的实验、生产设备,能够快速、高效地将细胞破碎并释放其胞内物质。高压细胞破碎仪具有破碎组织、细菌、病毒、孢子及其它细胞结构,均质、乳化、混合、消泡、分散、提取、加速反应等功能,故广泛应用于生物工程、基因工程、细胞工程、酶工程、蛋白质工程、微生物工程、生物化学、表面化学、药物化学、生物医药、生物制品等等实验室研究或企业生产。高压细胞破碎仪是胞内物质(蛋白质、酶、核酸、DNA/RNA)的提取和均质主要的样品制备手段,可用于蛋白质研究、核酸萃取、破碎不同prokaryotic(原核)、eurkaryotic细胞等,是生物工程及生物制药等行业研发及生产的标准设备。



1.jpg 纳通优势
       与其它系统相比,哺乳动物细胞表达系统最大的优势在于能够指导蛋白的正确折叠,提供复杂的N型糖基化和准确的O型糖基化等多种翻译后加工功能。在某些情况下其表达产物的活性远胜于原核表达系统及酵母、昆虫细胞等真核表达系统。哺乳动物细胞主要成分是细胞膜,比较好破碎,一般500bar以内的压力破碎一遍都可以破碎的比较好,因为表达病毒所耐受的压力不同所以破碎压力也不太一样,破碎压力一般 20bar到500bar。
◆破壁能力:高压设计,轻松上压;均质效率高,工艺稳定;稳定的破碎能力,更高的胞内物提取;纯机械破碎,无化学污染;可放大工业化生产工艺设备
◆控温效果:独特温控设计,内置和外置双向控温,确保均质过程及出料温度可控
◆活性保障:循环的控温系统,蛋白活性不失活,细胞破碎后,活性保值高达99%
◆无菌保障:金属结构连接,没有O型圈或垫片,无死角设计;在线排空结构设计;所有机型均可实现在线清洗(CIP)、循环清洗、拆装清洗、在位灭菌(SIP)


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